bio-engineering

1. 잡설 박테리아의 발현 벡터를 받으면 드는 생각이 있다. 처음 만든 사람은 무슨 서열과 유전자로 조합한걸까? 보통 찾으면 벼래별 벡터가 다 섞여서 필요없는 기능과 서열이 뭉쳐있긴하지만 꼭 들어가 있어야만 하는 서열이 있다. 유전자 발현 벡터의 구성 요소는 뭘까? 2. 유전자 발현 벡터 간단하다. 박테리아 기준으로 plasmid는 origin of replication (복제원점), selection marker, multiple cloning site가 정수라고 할 수 있겠다. Origin of replication:  plasmid를 복제할 수 있게끔하는 DNA 서열이다. plasmid가 균내에 몇개까지 존재할 수 있는지를 결정해준다. Selection marker:plasmid가 있는 놈과 없는 ..

실험 공부! 1. 잡설gibson assembly 방식은 DNA를 합치는 최고의 선택 중 하나다. 이름처럼 Daniel G. Gibson 아저씨가 만드신 이 kit는infusion cloning같은 유사한 기술들이 존재하고 있지만 들어가는 효소나 이렇건 달라도 그 기술을 사용하기 위한 우리의 준비물은 유사하기때문에이 글에서는 단순히 디자인이 어떻게 되는지를 가볍게 다루려고한다. 어쨌든 DNA cloning을 위해 사용하는 기술이니까.. 2. gibson assembly 왜 하지??? 먼저 벡터 클로닝을 하고 싶다! 라는 목표를 기본으로 깔고 가겠다 이 기술은 클로닝 기법 중 하나기 때문에 플라스미드 DNA를 제작하는 데 유전자를 삽입, 교체하고 싶다는 목표는 명확하게 가져가자 gibson assembly..

실험 공부! 1. 잡설현 시점에선 매우매우 자주 쓰이는 gibson assembly 방식은 최고의 범용성을 자랑하고설계도 아주 단순해서 여러모로 많이 사용되는 방식이다. 그에 비해 golden gate assembly는 제한효소 자리가 각 DNA 내에 존재하면 사용이 불가능에 가깝고기본 벡터가 나타나지 않도록하는 dpnI 처리를 하지 못한다.(당연히 운 좋고 손 좋은 사람들은 제한효소로 잘리든 말든 클로닝에 성공한다) 그렇다면 왜 써야하나.. 싶겠지만어쨌든 제한효소를 이용한 클로닝은 PCR을 최소화 할 수 있어 DNA 서열 내 error의 위험성이 적으니누군가는 선호하지 않을까..? 아무튼 이 방식이 사용되는 이유를 이해하기 위해금문교에서 이름을 따왔다는 golden gate assembly에 대해 설명..